宿主細(xì)胞殘留DNA提取及檢測(cè)
當(dāng)前，各類生物制品已被廣泛應(yīng)用于預(yù)防和治療疾病，尤其是新冠疫情爆發(fā)以來(lái)，在治療藥物篩選和疫苗研發(fā)等方面更是加大攻關(guān)力度。生物制品中的疫苗、抗體藥、重組蛋白等產(chǎn)品是在連續(xù)傳代的菌種株/細(xì)胞株上進(jìn)行表達(dá)和生產(chǎn)，雖然經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的純化工藝，但產(chǎn)品中仍有可能存在宿主細(xì)胞殘留的DNA片段，而這些殘留DNA不僅會(huì)降低生物制品的有效性，還存在傳染性和致瘤性的危險(xiǎn)。因此從生物制品有效性需求和安全角度考慮，宿主細(xì)胞殘留DNA是各項(xiàng)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)的重中之重。
各國(guó)藥品監(jiān)管機(jī)構(gòu)對(duì)宿主細(xì)胞殘留DNA的含量均有著嚴(yán)格的限度控制，也提供了多種經(jīng)典的檢測(cè)方法。建立合適的宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)方法對(duì)于監(jiān)測(cè)生物制品的安全性和質(zhì)量可控性至關(guān)重要。
宿主細(xì)胞殘留DNA的限定標(biāo)準(zhǔn)
宿主細(xì)胞殘留DNA定量檢測(cè)方法
其中，qPCR法因其具有高靈敏度、特異性、準(zhǔn)確性和耐用性等特點(diǎn)，現(xiàn)已成為生物制品工藝研究和產(chǎn)品質(zhì)量控制的首選檢測(cè)方法。
為解決宿主殘留DNA引起的生物制品安全性問(wèn)題，全式金自主研發(fā)了2款宿主細(xì)胞殘留DNA提取試劑盒以及3款宿主細(xì)胞(Vero、CHO、E.coli)殘留DNA的qPCR法檢測(cè)試劑盒，可快速高效提取并檢測(cè)生物制品中宿主DNA的殘留量。
宿主細(xì)胞殘留DNA提取
1. MagicPure? Host Cell Residual DNA Kit (EH201)
2. MagicPure? 32 Host Cell Residual DNA Kit (EH201-32)
產(chǎn)品特點(diǎn)
★ 適用于從≤200 μl生物制品樣本中提取宿主細(xì)胞(CHO、Vero、NSO、MDCK等)的微量DNA片段；
★ 殘留DNA回收率高；
★ 操作簡(jiǎn)單，無(wú)需離心，提取速度快；
★ 提取量高，純度高；
★ 可搭配高通量磁棒式核酸提取儀，其中EH201-32配套32通道自動(dòng)化核酸提取儀使用。
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)
分別以100-0.001 pg/μl（10倍梯度稀釋）濃度的Vero碎片化DNA樣品為模板，使用TransGen和Company S產(chǎn)品進(jìn)行宿主細(xì)胞殘留DNA提取回收并測(cè)試。結(jié)果表明，TransGen產(chǎn)品具有更高的DNA回收率。
3. TS-32 自動(dòng)核酸提取儀 (TS-32)
★ 觸屏操控，自由編程；
★ 自控系統(tǒng)，安全智能；
★ 精確控制，高效控溫；
★ 紫外消毒，杜絕污染；
★ 結(jié)果穩(wěn)定，高效提取；
★ 試劑開(kāi)放，兼容性好。
宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)
1.PerfectStart? Vero DNA Quantification Kit (DH111)
2.PerfectStart? CHO DNA Quantification Kit (DH121)
3.PerfectStart? E.coli DNA Quantification Kit (DH131)
4.PerfectStart? Pichia DNA Quantification Kit (DH141)
5.PerfectStart? SV40LTA& E1A DNA Quantification Kit (DH151)
6.PerfectStart? HEK293 DNA Quantification Kit (DH152)
產(chǎn)品特點(diǎn)
★ 3種抗體封閉，特異性高，靈敏度高，擴(kuò)增效率高，線性范圍廣；
★ 特殊優(yōu)化的qPCR反應(yīng)緩沖液，可提供更高的延伸速度，靈敏度和特異性；
★ 使用UDG酶和dUTP，有效防止PCR產(chǎn)物的污染，數(shù)據(jù)準(zhǔn)確；
★ 專屬性強(qiáng)：不同細(xì)胞系之間無(wú)交叉反應(yīng)；
★ 準(zhǔn)確性高：DNA標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)值偏差＜5%；
★ 耐用性強(qiáng)：DNA碎片化不會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成影響，碎片化DNA回收率高；可適配多種qPCR儀器；
★ 穩(wěn)定性高：經(jīng)反復(fù)凍融7次或4℃、室溫以及37℃放置8天后，產(chǎn)品性能均無(wú)影響。
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)
線性范圍廣
以梯度稀釋的宿主細(xì)胞DNA標(biāo)準(zhǔn)品為模板，使用TransGen產(chǎn)品進(jìn)行宿主細(xì)胞殘留DNA定量檢測(cè)。結(jié)果表明，TransGen產(chǎn)品具有寬廣的線性范圍。
DH111-Vero 線性范圍為：3 fg/μl-300 pg/μl，R2=1.000，擴(kuò)增效率為 102.3%，各濃度檢測(cè)值 CV<15%。
DH121-CHO 線性范圍為：3 fg/μl-300 pg/μl，R2=1.000，擴(kuò)增效率為 97.6%，各濃度檢測(cè)值 CV<15%。
DH131-E.coli 線性范圍為：50 fg/μl-500 pg/μl，R2=0.999，擴(kuò)增效率為 98.4%，各濃度檢測(cè)值 CV<15%。
DH141-Pichia 線性范圍為：30 fg/μl-300 pg/μl，R2=1，擴(kuò)增效率為 99.3%，各濃度檢測(cè)值 CV<15%。
DH151-SV40LTA&E1A 線性范圍為：3×102 copies/μl-3×106 copies/μl，R2=1，SV40LTA擴(kuò)增效率為 98.7%，E1A擴(kuò)增效率為 100.9%，各濃度檢測(cè)值 CV<15%。
SV40LTA
E1A
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